小鼠原代角膜內皮細胞專用培養基

小鼠原代角膜內皮細胞培養基由團隊精心優化，經過長期測試，本產品可保持小鼠原代角膜內皮細胞優良的生長狀態。

本產品中已包含小鼠原代角膜內皮細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代角膜內皮細胞的培養。

注意事項

僅限科研用。

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養基，放入 37℃水浴鍋中預熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養中，混勻后轉入

CO2 培養箱中培養靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，收集瓶內的培養基；

3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶，每個培養瓶各 1ml；

9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細胞應激分子抗原

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標簽)

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

大鼠配對框基因6(PAX6)試劑盒 ，英文名： PAX6 ELISA Kit

Mouse thromboxane B2 (TXB2) ELISA Kit 小鼠血栓素B2(TXB2)試劑盒

RatGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 大鼠γ氨基(GABA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGP210(MouseAi-glucoprotein210)ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體

細胞丁酰酯酶活性化學發光法定量試劑盒20次

RatThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)試劑盒規格：96T/48T

小鼠敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   規格：      英文縮寫：   TSP-1

小鼠血栓調節蛋白   英文名稱：   thrombomodulin   規格：      英文縮寫：   TM

小鼠TH糖蛋白   英文名稱：   Mouse Tamm Horsfall Protein   規格：      英文縮寫：   THP

小鼠抗酸性0酸酶5   英文名稱：   Mouse Tarate Resista Acid Phosphatase 5   規格：      英文縮寫：   AP 5

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 96T/48T

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內脂素/內臟脂肪素(visfatin)試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF試劑盒豚鼠肝細胞生長因子(HGF)試劑盒規格：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍蛋白(CP/CER)試劑盒規格：96T/48T

eIF3β蛋白抗體

過氧化酶1

小鼠原代角膜內皮細胞專用培養基TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細胞應激分子抗原

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標簽)

?無菌操作?：細胞培養需在無菌環境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。

?試劑選擇?：所用培養液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養液。

?培養條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養通常需5%CO2以維持培養液pH值穩定。培養箱內濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態、生長狀態與培養液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。